標準菌株的活化方法
實驗室必須保存有滿足試驗需要的標準菌種/菌株，除檢測方法（如藥物敏感試驗、抗菌性能測試）中規(guī)定的菌株外，還應包括應用于培養(yǎng)基（試劑）驗收/質量控制、方法確認/證實、陽性對照、陰性對照、人員培訓考核和結果質量的保證等所需的菌株。并且標準菌種必須從認可的菌種或標本收集途徑獲得。
▲CNAS-CL09-2013《檢測和校準實驗室能力認可準則在微生物檢測領域的應用說明》
常用標準菌種來源
美國菌種保藏中心ATCC
英國國家典型菌株保藏中心NCTC
中國醫(yī)學細菌保藏管理中心CMCC
中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心CICC
▲ ATCC菌株和CICC標準菌種的常見包裝形式
接下來一起了解下標準菌株的活化方法
ATCC標準菌種KWIK-STIKTM產(chǎn)品的活化說明
將KWIK-STIKTM產(chǎn)品平衡至室溫，撕開袋子。取出菌種管，揭下標簽上可撕取部分，貼于原始培養(yǎng)皿或QC記錄本上。捏碎管帽處的安瓿，使其釋放出液體，將管子直立以使液體流入管底。擠壓管底的菌球，使之與液體混合，以形成均勻的菌懸液。將棉簽浸于菌懸液中，并于培養(yǎng)皿約三分之一范圍內輕輕擠壓并旋轉涂抹。使用無菌接種環(huán)進行三區(qū)或四區(qū)劃線，以盡可能分離出單菌落。隨即在適合的溫度和條件下倒置培養(yǎng)已接種的原始培養(yǎng)皿。按照適宜的生物危害品處置方法（如121℃高壓30 min），丟棄菌種管。
▲ ATCC標準菌株KWIK-STIKTM產(chǎn)品操作說明
CICC標準菌種的操作說明
使用酒精棉球擦拭凍干菌種管表面進行消毒。將凍干管頂端置于酒精燈火焰上均勻加熱約1~2分鐘。立即滴2~3滴無菌水于加熱部位，使管壁破裂。使用鑷子或剪刀敲擊裂痕處，將管頂端敲落。吸取約0.5mL液體培養(yǎng)基于凍干管中，將凍干菌粉充分溶解。取0.2mL菌懸液轉移至裝有5mL~8mL液體培養(yǎng)基的試管中混勻，并取0.1mL菌懸液轉移至平板培養(yǎng)基上，進行劃線分離。將液體培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基置于合適條件下培養(yǎng)。按照適宜的生物危害品處置方法（如121℃高壓30 min），丟棄菌種管。
注：也可使用砂輪在凍干管頂端打磨出裂痕，再使用鑷子或剪刀將管頂端敲落。
▲ CICC標準菌株的打管方式
菌株活化用培養(yǎng)基的選擇
標準菌株的活化需使用非選擇性（不含任何抑菌成分），且營養(yǎng)富集的培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基建議同時使用，固體培養(yǎng)基上更易觀察到菌種的形態(tài)、純度，液體培養(yǎng)基更利于菌種的復蘇和增殖，在特定條件下培養(yǎng)以優(yōu)化菌株的生長和回收，常見菌種活化培養(yǎng)基見表1和表2。
表1常見菌種活化推薦使用固體培養(yǎng)基
表2常見菌種活化推薦使用液體培養(yǎng)基
微生物培養(yǎng)溫度
絕大多數(shù)微生物為嗜中溫，推薦培養(yǎng)溫度為36℃±1℃；
嗜冷菌（如小腸結腸炎耶爾森氏菌、熒光假單胞菌等）推薦培養(yǎng)溫度25℃~30℃；
嗜熱菌（如嗜熱脂肪芽孢桿菌）推薦培養(yǎng)溫度55℃~65℃。
微生物氧氣條件
絕大多數(shù)微生物為兼性厭氧菌，正常環(huán)境培養(yǎng)；
厭氧菌（如雙歧桿菌屬、梭菌屬）需在厭氧環(huán)境下培養(yǎng)；
微需氧菌（如彎曲桿菌屬）需在微需氧環(huán)境下培養(yǎng)。
厭氧和微需氧培養(yǎng)需要配備培養(yǎng)罐、厭氧（或微需氧）產(chǎn)氣袋和氧氣指示劑。厭氧（或微需氧）產(chǎn)氣袋為一次性產(chǎn)品，培養(yǎng)罐開啟后需更換產(chǎn)氣袋。陸橋代理進口品牌三菱瓦斯、OXOID和BD產(chǎn)品。
▲ 日本三菱產(chǎn)氣袋和培養(yǎng)罐
培養(yǎng)時間
將菌液接種到平板和肉湯中，在合適的溫度和氧氣條件下培養(yǎng)，一般細菌需要培養(yǎng)24h~48h，霉菌培養(yǎng)3d~5d。
生物安全
實驗室的生物安全防護級別應與其擬從事的試驗活動相適應。
沙門氏菌、單核細胞增生李斯特氏菌等第三類病原微生物，必須在二級生物安全柜中操作，確保生物安全！
